2024年1月25日，溶瘤病毒生物科技公司CG Oncology在納斯達(dá)克上市，當(dāng)天最高漲幅超過100%，市值超20億美元。溶瘤病毒再次吸引了醫(yī)藥工業(yè)界的目光。溶瘤病毒是以刪除致病序列的結(jié)構(gòu)改造型病毒為載體進(jìn)行構(gòu)建，可以選擇性地感染腫瘤細(xì)胞并在腫瘤組織內(nèi)復(fù)制，溶解和破壞腫瘤，而對正常組織不造成損傷。
截至2023 年5 月， 全球已批準(zhǔn)4款溶瘤病毒產(chǎn)品上市：2004年，Latima 公司開發(fā)的ECHO-7（ 商品名：Rigvir） 在拉脫維亞獲得批準(zhǔn)，用于治療黑色素瘤；2005 年，上海三維生物公司開發(fā)的H101（商品名：安柯瑞）在中國獲得批準(zhǔn)，用于治療鼻咽癌和頭頸部癌；2015 年，Amgen 公司開發(fā)的T-VEC（ 商品名：Imlygic）在美國獲得批準(zhǔn)，用于治療黑色素瘤，隨后該產(chǎn)品在歐盟也獲得批準(zhǔn)；2022 年， 第一三共株式會社（Daiichi Sankyo）開發(fā)的G47Δ（商品名：Delytact）在日本獲得批準(zhǔn)，用于治療惡性膠質(zhì)瘤。同時(shí)，近年來我國批準(zhǔn)的用于各類惡性腫瘤臨床試驗(yàn)的溶瘤病毒產(chǎn)品數(shù)量也迅速增加。為規(guī)范溶瘤病毒產(chǎn)品的研發(fā)和申報(bào)，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心（CDE）于2023 年2 月正式發(fā)布了《溶瘤病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》。該指導(dǎo)原則的出臺，為溶瘤病毒產(chǎn)品的研發(fā)、評價(jià)及申報(bào)提供了明確的指導(dǎo)方向。
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溶瘤病毒的生產(chǎn)用物料直接關(guān)系到產(chǎn)品的安全性和有效性，需要建立良好、規(guī)范的質(zhì)量管理體系。
溶瘤病毒生產(chǎn)原材料主要為病毒，為了確保產(chǎn)品質(zhì)量的一致性和穩(wěn)定性，生產(chǎn)用病毒需采用種子批系統(tǒng)管理。在病毒種子批建立過程中，需采用合理的篩選技術(shù)進(jìn)行病毒的單克隆篩選。病毒種子批建立過程中可能使用到的初始病毒需進(jìn)行適當(dāng)?shù)难芯亢唾|(zhì)量控制。
病毒種子批建立后，需開展相應(yīng)的檢定。檢定項(xiàng)目應(yīng)符合《中國藥典》或其他通行技術(shù)指導(dǎo)原則的相關(guān)規(guī)定，并根據(jù)病毒種子自身特點(diǎn)設(shè)定相應(yīng)的檢定項(xiàng)目。檢定項(xiàng)目一般包括鑒別（基因序列、血清型、電鏡形態(tài)等）、病毒滴度、外源因子（細(xì)菌、真菌、支原體、分枝桿菌（如適用）、病毒等）、初始病毒（或野生型病毒）、功能性檢測（如腫瘤選擇性、病毒復(fù)制能力、裂解/殺傷腫瘤細(xì)胞能力等）、抗病毒藥物敏感性（如適用）、目的蛋白鑒定和功能檢測（如適用）、病毒物理特性（如適用）等。
溶瘤病毒風(fēng)險(xiǎn)考查要點(diǎn)
溶瘤病毒產(chǎn)品類型較多，基因設(shè)計(jì)、生物學(xué)特性和作用機(jī)制情況復(fù)雜，使用到的生產(chǎn)/包裝細(xì)胞類型多樣，生產(chǎn)工藝和質(zhì)量研究也各有不同，因此，對于不同類型的溶瘤病毒產(chǎn)品，可基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)特征制定相應(yīng)的控制措施。溶瘤病毒產(chǎn)品質(zhì)量相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)一般包括以下方面：（1）對病毒傳染性、致病性和毒力等研究和認(rèn)識不足， 缺乏相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制而引入的風(fēng)險(xiǎn)。（2）病毒基因修飾和/或多次傳代導(dǎo)致病毒發(fā)生基因突 變的風(fēng)險(xiǎn)，以及病毒基因插入細(xì)胞基因組致癌的風(fēng)險(xiǎn)。（3）對細(xì)胞基質(zhì)認(rèn)知不夠充分、檢定項(xiàng)目不全面以及腫瘤細(xì)胞、宿主細(xì)胞 DNA 和宿主蛋白質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn)。（4）新型輔料人體使用安全性、免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)。（5）生產(chǎn)過程中添加的生產(chǎn)用原材料，尤其是動物/人源材料外源因子控制不全面的風(fēng)險(xiǎn)由于溶瘤病毒產(chǎn)品具有復(fù)制能力的特性，在生產(chǎn)過程中容易與引入的外源病毒結(jié)合發(fā)生異變，因此對于外源病毒因子的檢測與控制就尤為關(guān)鍵。由于溶瘤病毒具有復(fù)制能力，因而外源病毒因子檢測和控制存在一定挑戰(zhàn)，常見的控制策略包括：細(xì)胞庫、病毒種子批以及生產(chǎn)過程中使用的生產(chǎn)用原材料需進(jìn)行外源病毒因子的全面檢測和控制。生產(chǎn)過程中使用的動物/人源材料應(yīng)結(jié)合原材料來源進(jìn)行特異性病毒檢測，如人源性病毒、牛源性病毒、豬源性病毒等，病毒檢測種類應(yīng)全面，檢測方法應(yīng)滿足要求。選擇生產(chǎn)過程中最適階段的樣品（如未處理的培養(yǎng)收獲液）進(jìn)行外源病毒因子的檢測和控制，開展相應(yīng)研究以說明生產(chǎn)過程中檢測階段制定的合理性。在一些情況下，需要結(jié)合具體產(chǎn)品的情況，根據(jù)研究與驗(yàn)證結(jié)果，與以下控制相結(jié)合或相互補(bǔ)的控制策略，如：病毒去除/滅活工藝步驟、放行檢測（必要時(shí)，還可考慮在原液/成品中進(jìn)行外源病毒因子檢測）。中和抗體：病毒種子批的外源病毒因子檢測可通過加入中和抗體消除溶瘤病毒對檢測結(jié)果的影響，中和抗體的選用應(yīng)避免抗血清中存在中和潛在外源病毒因子的抗體，使用的中和抗體量應(yīng)為完全中和溶瘤病毒的最低使用量，并且檢測樣品的濃度應(yīng)合理且有研究依據(jù)，避免檢測樣品被度稀釋造成檢測靈敏度降低的風(fēng)險(xiǎn)。如因中和抗體不能充分中和溶瘤病毒，檢測結(jié)果受到干擾時(shí)，可在病毒種子生產(chǎn)中設(shè)置對照細(xì)胞。二代測序：聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等敏感檢測技術(shù)也可排除特異性的外源病毒因子污染的風(fēng)險(xiǎn)，但可能無法發(fā)現(xiàn)整個(gè)基因組序列中的其他非預(yù)期突變。建議采用基因測序技術(shù)對代表性工藝的一個(gè)或若干批次進(jìn)行全基因組測序，盡可能在早期階段積累較多的數(shù)據(jù)。建議在臨床申報(bào)階段對病毒種子開展遺傳穩(wěn)定性研究，確認(rèn)達(dá)到一定代次的病毒基因組與主種子批或工作種子批基因組序列一致。目前一代測序( 如Sanger法) 雖然具有測序長度可達(dá)1 000 bp和準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)，但測序成本較高、時(shí)間長且通量低，在應(yīng)用于溶瘤HSV 測序時(shí)，因其基因組的復(fù)雜性，使得采用一代測序技術(shù)存在較大局限，由此考慮采用二代測序(NGS) 深入分析基因組序列差異。（1）生產(chǎn)工藝相關(guān)操作對病毒理化特性、生物學(xué)活性等 產(chǎn)生不良影響的風(fēng)險(xiǎn)。（2）生產(chǎn)過程中污染/交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。（1）質(zhì)量研究項(xiàng)目不全面引入的風(fēng)險(xiǎn)。（2）分子變體、非完整包裝病毒（如非包膜病毒顆粒、 空殼病毒顆粒等）、錯(cuò)誤包裝病毒顆粒、無活性病毒顆粒、病毒顆粒聚集體、生物學(xué)活性等分析方法受限或變異性較大引入的風(fēng)險(xiǎn)。基于以上質(zhì)量相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)制定相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制策略。例如，針對生產(chǎn)用物料的風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)進(jìn)行全面的研究和風(fēng)險(xiǎn)評估，對生產(chǎn)工藝進(jìn)行充分研究和驗(yàn)證，結(jié)合不同病毒特點(diǎn)開展全面的質(zhì)量研究和質(zhì)量控制，并對質(zhì)量控制方法進(jìn)行全面驗(yàn)證。
2023年，《溶瘤病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》正式出臺，為溶瘤病毒產(chǎn)品的研發(fā)、評價(jià)及申報(bào)提供了明確的指導(dǎo)方向。
溶瘤病毒產(chǎn)品的安全性和有效性與其生產(chǎn)用物料緊密相連。因此，建立規(guī)范的質(zhì)量管理體系顯得尤為重要。其中，病毒種子批的系統(tǒng)管理是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，尤其是初始病毒種子批的建立和檢定工作更為重要。病毒種子批的檢定方法多種多樣，具體的操作方式和應(yīng)用場景也各有不同。
溶瘤病毒IND階段的安全性和質(zhì)量可控性研究是藥物走向后期的有效保證。在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)控制中，外源病毒因子的檢測與控制是重點(diǎn)和難點(diǎn)。目前，中和抗體和NGS等新方法的出現(xiàn)，為這一領(lǐng)域的深入研究提供了新的途徑。
